O conjugado ácido nalidíxico-triptofano foi sintetizado pelo acoplamento do ácido nalidíxico com o cloridrato de metilo de glicina e caracterizado por ponto de fusão, cromatografia de camada fina, valor de RM, microscopia eletrônica de varredura, estudo de difração de raios X e cromatografia líquida de alto desempenho. A estrutura do pró-fármaco foi confirmada por técnicas analíticas, análise elementar, espectroscopia de infravermelho com transformada de fourier, espectroscopia de ressonância magnética nuclear com transformada de fourier e espectroscopia de massa. Estudos de pré-formulação revelaram maior solubilidade aquosa com alteração não significativa na lipofilicidade do conjugado ácido tríptofano e nalidíxico do que o ácido nalidíxico. A reversão in vitro confirmou que a reversão pró-fármaco não era significativa no ambiente gástrico, assim o objetivo de contornar o GIT sem nenhuma liberação livre de drogas foi alcançado. No entanto, 67,83% de reversão do conjugado ácido triptófano e ácido nalidíxico para o ácido nalidíxico foi observado em tampão fosfato pH 6,8 na presença de 20% p/v de matéria fecal fresca de rato devido à hidrólise da ligação amida pela enzima amidase secretada pela microflora colônica.